產品簡介：

5min 即用型封閉液是一款無蛋白成分快速 Western Blot 的封閉液，可用于高效快速的封閉轉膜后的 NC 或 PVDF 膜，可替代脫脂奶粉、BSA 等傳統封閉液。

整個封閉過程僅需 5 分鐘，封閉效果可等同或者優于脫脂奶粉、BSA 等傳統封閉液，幫助用戶獲得 WB 更好的信號目的條帶與更低的背景結果。該試劑為無蛋白成分封閉液，可很好的避免內部成分與抗體發生交叉反應，適用性更加廣泛，普遍適用于常規抗體與磷酸化的抗體的 WB 檢測。

產品特點：

1. 超快免洗封閉——5min 完成封閉，無需洗滌，直接孵育一抗；

2. 無蛋白成分——很好的避免因封閉液成分中的蛋白與抗體非特異性結合導致的非特異性條帶出現或者                               高背景；

3. 適用范圍廣——通用于常規抗體，磷酸化抗體，生物素標記抗體；

4. 抗原抗體結合增強配方——可有效增加抗原抗體結合能力，更好的目的條帶信號，更低背景。

操作步驟：

1.將轉膜完成后的 NC 或者 PVDF 膜放入適宜體積的將 Y-Tec 5min 即用型封閉液中（注意需完全覆蓋膜，對于 6.5*8.5cm 的整膜，推薦最少使用量 20ml），置于水平搖床上，室溫條件下振蕩孵育 5 分鐘。

2.封閉后直接孵育一抗抗體（注意：該步驟不要用 TBST 或 PBST 洗滌，直接加入一抗孵育即可，洗滌反而會影響封閉效果），一抗孵育后續步驟按照正常實驗流程即可。

保存條件 ：

4℃保存，保質期 18 個月。

F&Q：

1.該封閉液也可能存在一些不適用的實驗體系，因此對于一些特殊的實驗或抗體效果不能達到預期的，可以考慮用更適宜的封閉體系來進行實驗；
2.信號弱或者無信號：
（1）目的蛋白樣品上樣量過少或者抗體濃度過低，可加大上樣量或者增加一抗工作抗體濃度；
（2）轉膜效率過低導致膜上無目的蛋白或者目的蛋白過少，重新轉膜后用麗春紅染色檢驗轉膜效果正常后          再進行后續封閉與一抗二抗孵育；
（3）抗體效價低，特異性差等原因造成，需要根據實驗情況進行調整。
3.背景高：
（1）抗體使用量過多或者蛋白上樣量過大會導致大量的非特異性條帶出現；
         解決方案：降低蛋白上樣量或者抗體濃度即可避免。
（2）轉印膜的洗滌時間次數過少或者時間過短；
         解決方案：補充 TBST 洗滌次數與洗滌膜的時間。
（3）試劑或儀器設備被污染等原因造成；
         解決方案：需要根據實驗具體情況進行調整。

友情提醒：實驗時請穿戴實驗服并佩戴一次性手套操作。