本試劑盒僅供科研使用。用于體外定量檢測兔血清、血漿或細胞培養上清液中的IL-1β濃度。使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑組分是否完整。如有產品包裝破損或質量投訴，請在收到貨一個月之內聯系我們。

IL-1β簡介：

白介素-1又稱淋巴細胞激活因子,由 IL-1α和 IL-1β兩種形式的多肽類細胞因子構成，與許多的細胞活性相關. 包括增殖、分化以及凋亡, 主要由血液中的單核細胞和巨噬細胞所產生, 各種上皮細胞,內皮細胞和間質細胞也能產生IL-1β, 但血液中的IL-1β 主要是由單核細胞和巨噬細胞所產生的IL-1β。兔IL-1β的cDNA編碼268個氨基酸的前體蛋白，通過半胱氨酸IL1β轉換蛋白酶的切割，形成116個氨基酸的活性細胞因子，即17 kDa的成熟IL1β，兔IL-1β與人，小鼠和大鼠的IL-1β有78%～81%的氨基酸同源性。

由激活巨噬細胞產生的IL-1β，經蛋白酶-1酶解活化后，成熟的白介素-1分子可以誘導白介素-2的釋放、促進B細胞成熟與增殖、誘導成纖維細胞生長因子活性，通過這些影響可以刺激胸腺細胞增殖，進而影響機體的免疫反應。研究表明白介素-1蛋白與炎癥初始反應相關，起到調節因子的作用，通常被認為是內源性致熱原；

細菌的內毒素或者一些非細菌的炎癥因子都會誘導IL‐1產生，然后被釋放到局部組織，IL-1β含量升高表明機體內有組織損傷或者感染產生, 如敗血癥等。對IL-1β的研究主要集中在各種生理和病理免疫反應和炎癥反應過程領域。

檢測原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣本中兔IL-1β的濃度。兔IL-1β捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標本或參考品時，其中的兔IL-1β會與捕獲抗體結合，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。當加入生物素化的抗兔IL-1β抗體后，抗兔IL-1β抗體與兔IL-1β結合，形成夾心的免疫復合物，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。隨后加入辣根過氧化物酶標記的親合素。生物素與親合素特異性結合，親合素連接的酶就會與夾心的免疫復合物連接起來；其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。最后加入顯色劑，若樣本中存在IL-1β將會形成免疫復合物，辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測，讀其450nm處的OD值，兔IL-1β濃度與OD₄₅₀值之間成正比，通過參考品繪制標準曲線，對照未知樣本中OD值，即可算出標本中IL-1β濃度。

兔IL-1β定量分析酶聯免疫檢測試劑盒組成:

標本收集:

1.標本的收集請按下列流程進行操作；

A.細胞上清標本離心去除懸浮物后即可；

B.血清標本應是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；

C.血漿標本，推薦用EDTA的方法收集

D.若待測樣本不能及時檢測，標本收集后請分裝，凍存于－20℃，避免反復凍融。

2.血清標本不應添加任何防腐劑或抗凝劑；

3.標本應清澈透明，檢測前樣本中如有懸浮物應通過離心去除。

4.請勿使用溶血，高血脂或污染的標本檢測，否則結果將不準確。

注：兔血清或血漿樣本請用樣本分析緩沖液做倍比稀釋后再檢測。

注意事項:

1.試劑盒請保存在2～8℃。

2.濃縮洗滌液因在低溫下可能有結晶，請水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。

3.標準品復溶加樣后，剩余部分請丟棄。

4.底物請勿接觸氧化劑和金屬。

5.加樣時，請及時更換槍頭，避免交叉污染。

6.嚴禁混用不同批號的試劑盒組分。

7.充分混勻對保證反應結果的準確性很重要，在加液后請輕輕叩擊邊緣以保證混勻。

8.室溫反應，請嚴格控制在25～28℃。

9.洗滌過程是至關重要的，洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。

10.試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙復孔。

11.加樣過程中避免氣泡的產生。

12.血清和血漿標本的檢測時，檢測抗體的孵育時間應適當延長。

檢測前準備工作:

1.試劑盒自冰箱中取出后應置于室溫（25-28℃）平衡20分鐘；每次檢測后剩余試劑請及時于2～8℃保存。

2.將濃縮洗滌液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加19份水)。

3. 如有5×標準品稀釋液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加4份水)。

4.標準品:按標簽復溶體積用1X標準品稀釋液復溶使IL-1β終濃度達到1200pg/ml，室溫反應，請嚴格控制在25～28℃，靜置15～20分鐘后輕輕混勻（建議抽吸幾次）待徹底溶解，用標準品稀釋液倍比梯度稀釋后依次加入檢測孔中。（標準曲線取七個點，最高濃度為1200pg/ml,標準品稀釋液直接加入作為0濃度.）

本試劑盒僅供科研使用。用于體外定量檢測兔血清、血漿或細胞培養上清液中的IL-1β濃度。使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑組分是否完整。如有產品包裝破損或質量投訴，請在收到貨一個月之內聯系我們。如有其他疑問請登錄安徽巧伊生物科技有限公司網站或致電本公司。

IL-1β簡介：

白介素-1又稱淋巴細胞激活因子,由 IL-1α和 IL-1β兩種形式的多肽類細胞因子構成，與許多的細胞活性相關. 包括增殖、分化以及凋亡, 主要由血液中的單核細胞和巨噬細胞所產生, 各種上皮細胞,內皮細胞和間質細胞也能產生IL-1β, 但血液中的IL-1β 主要是由單核細胞和巨噬細胞所產生的IL-1β。兔IL-1β的cDNA編碼268個氨基酸的前體蛋白，通過半胱氨酸IL1β轉換蛋白酶的切割，形成116個氨基酸的活性細胞因子，即17 kDa的成熟IL1β，兔IL-1β與人，小鼠和大鼠的IL-1β有78%～81%的氨基酸同源性。

由激活巨噬細胞產生的IL-1β，經蛋白酶-1酶解活化后，成熟的白介素-1分子可以誘導白介素-2的釋放、促進B細胞成熟與增殖、誘導成纖維細胞生長因子活性，通過這些影響可以刺激胸腺細胞增殖，進而影響機體的免疫反應。研究表明白介素-1蛋白與炎癥初始反應相關，起到調節因子的作用，通常被認為是內源性致熱原；

細菌的內毒素或者一些非細菌的炎癥因子都會誘導IL‐1產生，然后被釋放到局部組織，IL-1β含量升高表明機體內有組織損傷或者感染產生, 如敗血癥等。對IL-1β的研究主要集中在各種生理和病理免疫反應和炎癥反應過程領域。

檢測原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣本中兔IL-1β的濃度。兔IL-1β捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標本或參考品時，其中的兔IL-1β會與捕獲抗體結合，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。當加入生物素化的抗兔IL-1β抗體后，抗兔IL-1β抗體與兔IL-1β結合，形成夾心的免疫復合物，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。隨后加入辣根過氧化物酶標記的親合素。生物素與親合素特異性結合，親合素連接的酶就會與夾心的免疫復合物連接起來；其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。最后加入顯色劑，若樣本中存在IL-1β將會形成免疫復合物，辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測，讀其450nm處的OD值，兔IL-1β濃度與OD₄₅₀值之間成正比，通過參考品繪制標準曲線，對照未知樣本中OD值，即可算出標本中IL-1β濃度。

兔IL-1β定量分析酶聯免疫檢測試劑盒組成:

標本收集:

1.標本的收集請按下列流程進行操作；

A.細胞上清標本離心去除懸浮物后即可；

B.血清標本應是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；

C.血漿標本，推薦用EDTA的方法收集

D.若待測樣本不能及時檢測，標本收集后請分裝，凍存于－20℃，避免反復凍融。

2.血清標本不應添加任何防腐劑或抗凝劑；

3.標本應清澈透明，檢測前樣本中如有懸浮物應通過離心去除。

4.請勿使用溶血，高血脂或污染的標本檢測，否則結果將不準確。

注：兔血清或血漿樣本請用樣本分析緩沖液做倍比稀釋后再檢測。

注意事項:

1.試劑盒請保存在2～8℃。

2.濃縮洗滌液因在低溫下可能有結晶，請水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。

3.標準品復溶加樣后，剩余部分請丟棄。

4.底物請勿接觸氧化劑和金屬。

5.加樣時，請及時更換槍頭，避免交叉污染。

6.嚴禁混用不同批號的試劑盒組分。

7.充分混勻對保證反應結果的準確性很重要，在加液后請輕輕叩擊邊緣以保證混勻。

8.室溫反應，請嚴格控制在25～28℃。

9.洗滌過程是至關重要的，洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。

10.試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙復孔。

11.加樣過程中避免氣泡的產生。

12.血清和血漿標本的檢測時，檢測抗體的孵育時間應適當延長。

檢測前準備工作:

1.試劑盒自冰箱中取出后應置于室溫（25-28℃）平衡20分鐘；每次檢測后剩余試劑請及時于2～8℃保存。

2.將濃縮洗滌液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加19份水)。

3. 如有5×標準品稀釋液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加4份水)。

4.標準品:按標簽復溶體積用1X標準品稀釋液復溶使IL-1β終濃度達到1200pg/ml，室溫反應，請嚴格控制在25～28℃，靜置15～20分鐘后輕輕混勻（建議抽吸幾次）待徹底溶解，用標準品稀釋液倍比梯度稀釋后依次加入檢測孔中。（標準曲線取七個點，最高濃度為1200pg/ml,標準品稀釋液直接加入作為0濃度.）

靈敏度，特異性和重復性：

1.靈敏度：多次重復結果表明，最小檢出量為14.4pg/ml。

2.特異性：與兔IL-2，IL-4，小鼠IL-1β，大鼠IL-1β等沒有交叉反應。

3.重復性：板內，板間變異系數均〈10%.

參考文獻：

1. Dinarello, C.A. (2009) Annu. Rev. Immunol. 27:519.

2. Cannon, J.G. et al. (1989) J. Immunol. 142:2299.

3. Weber, A. et al. (2010) Sci. Signal. 3:cm1.

4. Boraschi, D. and A. Tagliabue (2006) Vitam. Horm. 74:229.

5. Martinon, F. and J. Tschopp (2007) Cell Death Differ. 14:10.