本試劑盒僅供科研使用。用于體外定量檢測豬血清、血漿或細胞培養上清液中的IL-15濃度。使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑組分是否完整。如有產品包裝破損或質量投訴，請在收到貨一個月之內聯系我們。

IL-15簡介：

白細胞介素15（IL-15）與IL-2許多生物學特性類似，曾被命名為IL-T，因其最早從一種由人類皮膚T淋巴細胞系HuT 102中發現的細胞因子。豬的IL-15的 cDNA克隆都編碼162個氨基酸的前體蛋白，該前體蛋白包含一個48個氨基酸的先導序列和一個114個氨基酸的IL-15序列。在豬的體內，發現兩種亞型包括全部成熟序列和一種較短信號序列的亞型，該較短的前肽的亞型不能分泌。豬IL-15與人IL-15的氨基酸序列有78%同源性。

IL-15的生物學活性與IL-2相似，可刺激自然殺傷細胞、激活的外周血T淋巴細胞、腫瘤浸潤淋巴細胞（TIL）和B細胞的生長。此外，研究還表明，IL-15可以作為人類血液T淋巴細胞的趨化劑，并誘導NK細胞中的淋巴因子激活的殺傷細胞（LAK）活性和細胞溶解效應細胞的產生。IL-15對不參與免疫反應的細胞也有作用。

檢測原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣本中IL-15 的濃度。IL-15 捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標本或參考品時，其中的IL-15 會與捕獲抗體結合，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。當加入生物素化的抗豬IL-15 抗體后，抗豬IL-15 抗體與IL-15 接合，形成夾心的免疫復合物，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。隨后加入辣根過氧化物酶標記的親合素。生物素與親合素特異性結合，親合素連接的酶就會與夾心的免疫復合物連接起來；其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。最后加入顯色劑，若樣本中存在IL-15 將會形成免疫復合物，辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測，讀其450nm處的OD值，IL-15 濃度與OD₄₅₀值之間呈正比，通過參考品繪制標準曲線，對照未知樣本中OD值，即可算出標本中IL-15 濃度。

豬IL-15定量分析酶聯免疫檢測試劑盒組成:

標本收集:

1.標本的收集請按下列流程進行操作；

A.細胞上清標本離心去除懸浮物后即可；

B.血清標本應是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；

C.血漿標本，推薦用EDTA的方法收集

D.若待測樣本不能及時檢測，標本收集后請分裝，凍存于－20℃，避免反復凍融。

2.血清標本不應添加任何防腐劑或抗凝劑；

3.標本應清澈透明，檢測前樣本中如有懸浮物應通過離心去除。

4.請勿使用溶血，高血脂或污染的標本檢測，否則結果將不準確。

注：豬血清或血漿樣本請用樣本分析緩沖液做倍比稀釋后再檢測。

注意事項:

1.試劑盒請保存在2～8℃。

2.濃縮洗滌液因在低溫下可能有結晶，請水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。

3.標準品復溶加樣后，剩余部份請丟棄。

4.底物請勿接觸氧化劑和金屬。

5.加樣時，請及時更換槍頭，避免交叉污染。

6.嚴禁混用不同批號的試劑盒組份。

7.充分混勻對保證反應結果的準確性很重要，在加液后請輕輕叩擊邊緣以保證混勻。

8.室溫反應，請嚴格控制在25～28℃。

9.洗滌過程是至關重要的，洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。

10.試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙復孔。

11.加樣過程中避免氣泡的產生。

12.血清和血漿標本的檢測時，檢測抗體的孵育時間應適當延長。

檢測前準備工作:

1.試劑盒自冰箱中取出后應置室溫（25-28℃）平衡20分鐘；每次檢測后剩余試劑請及時于2～8℃保存。

2.將濃縮洗滌液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加19份水)。

3. 如有5×標準品稀釋液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加4份水)。

4.標準品:按標簽復溶體積用1X標準品稀釋液復溶使IL-15終濃度達到4000pg/ml，室溫反應，請嚴格控制在25～28℃，靜置15~20分鐘后輕輕混勻（建議抽吸幾次）待徹底溶解，用標準品稀釋液倍比梯度稀釋后依次加入檢測孔中。（標準曲線取七個點，最高濃度為8000 pg/ml,標準品稀釋液直接加入作為0濃度.）

洗滌方法:

自動洗板機或人工洗板：每孔洗滌液為300ul，注入與吸出間隔15-30秒。最后一次洗板完成后將板倒扣著在厚吸水紙上用力拍干。

實驗過程需自備的材料：

1.不同規格的加樣槍及相應的槍頭；   

2.酶標儀；

3.自動洗板機；                     

4.去離子水或雙蒸水；

操作步驟:

1.通過計算并確定一次性實驗所需的板條數，取出所需板條放置在框架內，暫時用不到板條請放回鋁箔袋密封，保存于4℃。

2.建議設置本底較正孔，即空白孔,設置方法為該孔只加TMB顯色液和中止液。每次實驗均需做標準品對照并畫出標準曲線。

3. 分別將樣品或不同濃度標準品按照100μl/孔加入相應孔中，用封板膜封住反應孔，室溫（25-28℃）孵育120分鐘。對于血清血漿樣本，可能因樣本中含量太低而檢測不出，檢測時先加50ul的樣本分析緩沖液，再加50uL樣本。如檢測超出范圍，請先加50ul的樣本分析緩沖液，再加入用標準品稀釋液稀釋后的樣本50μl檢測。請注意記錄好樣品的稀釋倍數，此處加樣量50ul相當于已稀釋了2倍。         

4.洗板5次，且最后一次置厚吸水紙上拍干。

5.加入生物素化抗體工作液(100ul/孔)。用封板膠紙封住反應孔，室溫（25-28℃）孵育60分鐘。   

6.洗板5次，且最后一次置厚吸水紙上拍干。

7.加入親和素連接的HRP酶(100ul/孔)。用封板膠紙封住反應孔，避光室溫（25-28℃）孵育20分鐘。

8.洗板5次，且最后一次置厚吸水紙上拍干。

9.加入顯色劑TMB100ul/孔，避光室溫（25-28℃）孵育20分鐘。

10.加入終止液50ul/孔,混勻后即刻測量OD450值。

結果判斷:

1.復孔的值在20%的差異范圍內結果才有效，復孔的值平均后可作為測量值。

2.每個標準品或標本的OD值應減去本底校正孔的OD值。

3.手工繪制標準曲線。以標準品濃度作橫坐標，OD值作縱坐標，以平滑線連接各標準品的坐標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。

4.若標本OD值高于標準曲線上限，應適當稀釋后重測，計算濃度時應乘以稀釋倍數。

典型數值和參考曲線