原代細胞收貨注意事項：

貼壁細胞經過快遞運輸顛簸會出現漂浮脫落等情況： 收到先放培養箱靜置穩定。如有脫落需收集處理，處理細節請查閱以下信息，原瓶內為完全培養基，可以收集使用。

收到細胞后請把細胞圖片狀態發我們， 根據圖片可以給出接下來的處理建議（傳代或者換液），首次建議一比二傳代至2個T25。

貼壁細胞傳代步驟：
準備工作：胰酶和完全培養基（需要提前37度復溫）、PBS（常溫）避免細胞遇冷受刺激

（1） 吸出原培養液

（2） 加入2ml左右PBS，輕輕晃動培養瓶潤洗細胞，吸出PBS丟棄

（3） 加入1ml左右0.25%含EDTA的胰酶，輕輕晃動培養瓶使之浸潤所有細胞。

（4） 根據不同的細胞放入培養箱時及時關注消化時間，消化約2-3min，顯微鏡下看到細胞中間的細胞明顯分離變圓細胞間隙變大，顯微鏡下看細胞呈單個游離狀態，側立培養瓶細胞可以滑落時可終止消化，可以輕拍培養瓶側身。（消化時主要看消化狀態，如果沒有變圓，側立時不能滑落時，可以適當延長消化時間，每30s觀察一次細胞）

（5） 加入3ml含10%血清的培養基終止消化，輕輕吹打細胞使之脫壁并在液體里反復輕輕吹打（不要太用力）使細胞盡量呈單顆細胞的懸浮液。

（6） 收集細胞懸液離心，1000rpm/min（約250g）  5分鐘，離心完吸出上清丟棄。

（7） 加入新鮮完全培養基，吹打幾下混勻細胞即可，按需接種到新培養瓶，補足完全培養基，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進行培養。

（8） 檢查培養箱二氧化碳，溫度和水盤。

貼壁細胞傳代的方法，特別注意的是第4步消化過程，消化至到細胞完全變圓以后側立培養瓶細胞可以出現滑落時再終止消化。消化到這樣的一個狀態，后續輕輕稍微吹一下即可很好的分散細胞。

后續處理建議：傳代后2-3天換液一次即可，（如細胞第二天全部貼壁培養基顏色變黃，可以換液，）無需每天換液（換液太勤可能會損失細胞影響細胞狀態）換液時候如果沒有特殊情況也可以不用PBS清洗。

原代懸浮細胞接收注意事項:   

1. 懸浮細胞經過快遞運輸，會出現細胞皺縮和死細胞碎片等情況，收到時先放培養箱靜置4小時以上，2.將瓶內全部培養基吸至離心管內離心收集，3.使用5-6ml新鮮培養基重懸細胞沉淀后接種T25培養瓶中繼續培養。

懸浮細胞傳代：
如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。                                        方法一：將細胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補加新鮮培養液后重懸混勻按1：2的比例分到 新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養基以保持細胞的生長活力。                                                                                 方法二：1) 半換液處理，豎著培養瓶靜置 10-20min 左右，肉眼可見大部分細胞沉在底部；                                                                                                                              2) 輕輕吸掉 3ml 左右培養基，將剩余細胞懸起混勻；                                                   3) 將細胞懸液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 6-8 mL 完全培養基的培養皿中或者培養瓶中，一般這樣傳代 3 次左右可以離心傳代一次。                                                                                            注意：使用試劑需要提前37度復溫，避免細胞遇冷受刺激皺縮。

后續處理建議：懸浮細胞狀態在無碎片無黑點的情況下無需換液，觀察培養基偏黃及時進行補液2ml左右，當細胞出現分泌物可以使用半換液法處理，參考圖片

離心管方式收貨：收到離心管酒精消毒放入培養穩定2-4H后進行1000rpm離心5min。去除上清后保留細胞沉淀用新鮮培養基重懸混勻轉移至培養瓶進行培養，次日觀察細胞的狀態及密度.